|
Гинекология, андрология и воспроизведение домашних животных - часть 2n – num?rul p?tr??elelor оn care s-au num?rat spermii (80). Оn cazul spermei de taur ?i berbec, cu gradul de dilu?ie de 1/200, оnlocuind formula se ob?ine: [pic] sau [pic], sau formula simplificat? este: C=Nx10000 ?i pentru a afla num?rul de spermi оntr-un mililitru de sperm?, rezultatul se оnmul?e?te cu 1000. Оn cazul spermei de vier ?i arm?sar, cu gradul de dilu?ie de 1/20, formula simplificat? pentru aprecierea concentra?iei game?ilor este: C=Nx1000, iar pentru exprimarea concentra?iei оn spermi/ml rezultatul de asemenea ob?inut se mai оnmul?e?te cu 1000. Metoda fotocolorimetric? Este o metod? rapid? de num?rare care se bazeaz? pe diferitele grade de opacitate pe care le are sperma pus? оn fa?a unui fascicul de lumin? ce trece prin dreptul unei celule fotoelectrice. Оn practic? se folosesc fie fotocolorimetre ce indic? direct num?rul de spermi оn miliarde, fie fotocolorimetre ce trebuie оn prealabil etalonate prin m?sur?tori repetate executate prin metoda hemocitometric?. Metoda electronic? Principiul metodei se bazeaz? pe modificarea de c?tre spermi a cвmpului electronic creat de 2 electrozi din platin?, plasa?i оntr-un capilar de pasaj al spermei. Exist? diferite tipuri de aparate electronice cel mai utilizat fiind tipul Coulter. Aprecierea mobilit??ii spermilor Mobilitatea spermilor se apreciaz? оn func?ie de mi?c?rile spermilor, care se pot urm?ri cu u?urin?? оn cвmpul microscopic. Оn func?ie de aspectul mi?c?rilor, оntr-o pic?tur? de sperm? aplicat? pe o lam? ?i acoperit? cu o lamel?, la temperatura fiziologic?, putem оntвlni mai multe categorii de spermi ?i anume: - spermi cu mi?care de оnaintare sau rectilinie; - spermi cu mi?c?ri circulare sau «оn manej»; - spermi cu mi?c?ri vibratorii sau ondulatorii; - spermi f?r? mi?c?ri (mor?i). Posed? fecunditate numai spermii care au mi?c?ri de retropulsie (pendulare), «оn manej» ?i cei imobili. Оn cazul cвnd to?i spermii din cвmpul microscopic sunt imobili (mor?i), sperma respectiv? se noteaz? cu «N» (necrospermie). Deoarece o mare varietate de factori fizico-chimici ?i biologici afecteaz? mobilitatea spermilor, examinarea spermei trebuie efectuat? imediat dup? recoltare, evitвndu-se varia?iile de temperatur? (?ocul termic), poluarea cu ap?, urin?, alte substan?e chimice, lubrefian?i etc. La speciile cu sperm? foarte deas? (berbecul), pentru facilitarea examin?rii microscopice a spermei este indicat? diluarea materialului seminal cu o solu?ie citrat? sau cu clorur? de sodiu, sol. 1%. Pentru aprecierea mobilit??ii spermilor, la noi оn republic? se folose?te sistemul notelor de la 10 la 1. Conform acestui sistem, aprecierea activit??ii sau mobilit??ii spermilor se face astfel: 10 puncte – cвnd to?i spermii au mi?care rectilinie; 9 puncte – cвnd 90% au mi?care de оnaintare; 8 puncte – cвnd 80% au mi?care de оnaintare; …2 puncte – cвnd 20% au mi?care de оnaintare. Оn mod obi?nuit, se admit pentru prelucrare ejaculatele notate cu cel pu?in 8 puncte la taur ?i berbec ?i 6-7 puncte la vier ?i arm?sar, (60-80% spermi cu mi?c?ri active de оnaintare). Spermii care prezint? altfel de mi?c?ri (circulatorii, ondulatorii, retrograde оmpreun? cu cei cu mi?c?ri de оnaintare foarte lente sau agonice primesc aceea?i apreciere ca ?i spermii mor?i. Examenul morfologic al spermilor Оn sperma reproduc?torilor domestici se оntвlnesc frecvent, оn propor?ii variabile, spermi cu diferite anomalii (teratologici), precum ?i spermi imaturi, care pot influen?a negativ fecunditatea, cвnd procentul acestora dep??e?te anumite limite. Pentru acest motiv, examenul spermei trebuie completat ?i cu determinarea raportului de spermi teratologici ?i imaturi. Anomaliile morfologice ale game?ilor se pot оncadra оn: - anomalii primare, determinate de tulburarea spermiogenezei, avвnd o localizare оn tubii seminiferi, pвn? la ajungerea оn epididim ?i constau оn alterarea morfologic? ?i structural? a capului spermului; - anomalii secundare, care se produc оn epididim datorit? stagn?rii prelugite la acest nivel, sau sunt efecte ale ac?iunii unor factori termici (?ocul termic), chimici sau mecanici din timpul ejacul?rii ?i manipul?rii spermei. Anomaliile secundare vizeaz? alterarea piesei intermediare sau a cozii game?ilor. Anomaliile capului pot fi de form? ?i m?rime ?i se refer? la micro- ?i macrocefalie, spermi cu capul dublu sau multiplu, cap alungit ?i оngust, оn form? de par?, neregulat ?i mic – sferic. Alte anomalii ale capului spermului constau оn cap deta?at (liber) ?i invaginarea оnveli?ului nuclear. Anomaliile acrozomului se refer? la: acrozom aplatizat, incomplet, curbat sau deta?at. Piesele intermediare anormale pot fi: оngro?ate, r?sucite, cu noduri duble, gвt filiform ?i cu pic?tura protoplasmatic? proximal? sau distal?. Оn procesul matur?rii epididimare a spermilor pic?turile protoplasmatice migreaz? de la gвt spre extremitatea distal? a piesei intermediare ?i dispare de regul? оnaintea ejacul?rii; aceast? migrare a pic?turii protoplasmatice se realizeaz? оn capul epididimului. Оntr-un ejaculat normal, procentul spermilor cu pic?tura protoplasmatic? (imaturi) nu trebuie s? dep??easc? 2-3% la berbec ?i taur ?i 10% la vier ?i arm?sar. Dep??irea acestui procent denot? epiuizarea sexual? a masculilor. Afec?iunile epididimului altereaz? conforma?ia normal? a piesei intermediare, fapt care reduce mobilitatea spermilor ?i se asociaz? cu infecunditatea. Examenul morfologic al spermilor poate depista unele forme de anomalii ale cozii: cozi duble sau r?sucite, scurte sau absente, pic?turi protoplasmatice localizate proximal sau distal. Dup? datele din literatura de specialitate, procentul maxim de spermi anormali (teratologici) admi?i оn sperma de taur este de 18%, inclusiv 3-4% cu anomalii ale capului, 4-10% - la piesa intermediar? ?i 0,5-2% - la coada spermului. Berbecii cu o fecunditate normal? nu dep??esc 14% inciden?? a spermilor anormali; vierii ?i arm?sarii au оn medie 20% de spermi teratologici. Determinarea spermilor anormali se face prin utilizarea diferitor metode de colorare, care permit atвt aprecierea de ansamblu a game?ilor, cвt ?i anumitelor aspecte legate de structura lor. Determinarea spermilor cu anomalii primare sau secundare sau a celor imaturi, se poate face prin efectuarea unor frotiuri din sperm?, care apoi se coloreaz? cu: Giemsa rapid, fuxin? Pfeiffer, solu?ie albastru de metilen 1%, eozin? 5%, hematoxilin? etc. Din sperma proasp?t recoltat? se prepar? mai multe frotiuri, care se fixeaz? prin uscare la aer sau оn alcool 96(, timp de 2 minute. Dup? fixare se procedeaz? la colorarea cu o solu?ie din cele men?ionate timp de 3-5 minute. Frotiurile colorate se spal? sub un jet mic de ap?, se usuc? ?i apoi se examineaz? la microscop cu putere de m?rire de 200-400 ori. Оn timpul examenului microscopic se noteaz? separat num?rul de spermi normali ?i al celor cu anomalii, pвn? se examineaz? cca 500 spermi. Pe baza num?rului de spermi examina?i se calculeaz? propor?ia dintre cei anormali ?i normali. Determinarea propor?iei de spermi vii ?i mor?i Se poate realiza printr-o colora?ie intravital?, compus? din 3 gr citrat de sodiu, 100 ml ap? distilat?, 1 gr eozin? ?i 5 gr negrozin?. Membrana celular? a spermilor mor?i devine permeabil? la eozin?, astfel c? ace?tia se coloreaz? оn ro?u, оn compara?ie cu spermii vii, care r?mвn necolora?i. Calculul acestei propor?ii rezult? din num?rarea a 100-500 celule spermatice ?i exprimarea procentual? a game?ilor vii ?i mor?i dintr-un ejaculat. Teste biochimice pentru aprecierea calit??ii spermei Оn practica оns?mвn??rilor artificiale, testele biochimice sunt pu?in folosite, totu?i cu valoare de diagnostic sunt: testele de rezisten?? termic?, rezisten?a la solu?ii hipertonice ?i testul reducerii albastrului de metilen. Proba biologic? Rolul hot?rвtor оn analiza spermei оl are aprecierea fecundit??ii spermilor, realizat? prin proba biologic?. Concep?ia (fecunditatea) depinde de gradul de оnrudire al femelei cu masculul, de starea s?n?t??ii reproduc?torilor (femelei ?i masculului), condi?iile de alimenta?ie ?i оntre?inere etc. De aceea, pentru aprecierea fecundit??ii unui reproduc?tor se alege un grup de femele tinere, nulipare, cu stare de s?n?tate perfect?, care se monteaz? sau se оns?mвn?eaz? artificial cu sperma masculului respectiv. Dup? num?rul femelelor devenite gestante se fac concluzii asupra capacit??ii de fecundare a reproduc?torului. Astfel, se consider? normal? sperma unui reproduc?tor care realizeaz? instalarea gesta?iei, dup? prima оns?mвn?are, la 70-75% din femele. Diluarea spermei Diluarea ?i conservarea materialului seminal sunt opera?ii prin care se asigur? men?inerea viabilit??ii ?i puterii fecundative a spermilor un timp variabil оn afara c?ilor genitale. Practicarea оns?mвn??rilor artificiale arat? c? оntr-un diluant bine preg?tit ?i ales spermii о?i p?streaz? viabilitatea ?i celelalte оnsu?iri biologice un timp mai mult mai оndelungat decвt оn mediul natural. Aceasta se explic? prin urm?toarele. Оn primul rвnd, plasma seminal?, constituit? din secre?iile anexelor testiculare ?i ale glandelor anexe ale aparatului genital nu serve?te ca mediu ideal pentru p?strarea spermilor оn afara organismului. Secre?ia slab alcalin? a prostatei stimuleaz? mobilitatea spermiilor, care pвn? la acest moment se aflau оn canalul epididimar, оn stare de anabioz?. Acest fenomen este important pentru a asigura оnaintarea spermilor prin c?ile genitale femele ?i fecundarea normal? a ovulelor. Оns?, activarea mobilit??ii ?i men?inerea viabilit??ii spermilor de c?tre produsul de secre?ie al glandelor anexe este оnso?it? de distrugerea tegumentului lipoproteic al spermilor sub ac?iunea ionilor de Na+ ?i K-, care se con?in оn plasma seminal?. Ionii de Na+ ?i alte metale neutralizeaz? оnc?rc?tura electric? negativ? a spermilor ?i provoac? aglutinarea lor. Alt? cauz? care duce la peirea spermilor оn afara organismului este diminuarea resurselor energetice pentru metabolismul celulelor spermatice ?i, оn primul rвnd, al zaharurilor. Glucoza este considerat? surs? principal? de energie a spermilor atвt оn mediu aerob, cвt ?i оn cel aerob. La sperma cu o concentra?ie ridicat? ?i bogat? оn fructoz? (taur, berbec) se constat? diminuarea оntr-un timp foarte scurt a pH-ului rezultat din acumularea acidului lactic, deci din fructoliz?. Ritmul cre?terii acidit??ii dup? ejaculare are o semnifica?ie important?; acidul lactic ac?ioneaz? negativ asupra spermilor, iar concentra?iile mari оi omoar?. Sc?derea sau absen?a sarcinii electrice, care are loc mai ales оn urma acidifierii mediului, este urmat?, de asemenea, de aglutinarea spermilor. Unul din factorii importan?i ai mediului care ac?ioneaz? asupra spermilor este temperatura. La coborвre brusc?, mai ales sub +18(C spermii sunt supu?i ?ocului termic ?i mor. Prin urmare, cauzele concrete care duc la peirea spermilor оn afara c?ilor genitale sunt: . subnutri?ia spermilor ca urmare a epuiz?rii rezervelor energetice din game?i ?i plasma seminal?; . intoxica?ia spermilor cu produsele metabolice; . deteriorarea tegumentului lipoproteic, exfolierea membranei celulei spermatice ?i pierderea sarcinii electrice negative datorit? acumul?rii оn plasma seminal? a acidului lactic; . ac?iunea negativ? asupra spermilor a bacteriotoxinelor ?i bacteriolizinelor; . varia?iile de temperatur? care provoac? ?ocul termic. De aceea, pentru prelungirea viabilit??ii spermilor оn afara organismului se impune: . reducerea activit??ii cinetice a celulelor spermatice; . asigurarea game?ilor cu substan?e nutritive; . protejarea spermilor de distrugerea tegumentului lipoproteic ?i al membranei celulei spermatice; . diminuarea intoxica?iei spermilor prin diluarea plasmei seminale. Toate aceste condi?ii le asigur? mediile de dilu?ie care con?in ingridien?i cu propriet??i protectoare, nutritive, neutralizante etc. Оn afar? de asigurarea mediilor favorabile pentru prelungirea viabilit??ii spermilor «in vitro», diluarea spermei urm?re?te ?i alte obiective, printre care: cre?terea volumului total al ejaculatului ?i posibilitatea de a оns?mвn?a un num?r cвt mai mare de femele dintr-un ejaculat. Principiul ?tiin?ific care st? la baza dilu?rii spermei este acela c? din num?rul total de spermi depu?i de un mascul оn c?ile genitale feminine prin mont?, numai un procent mic de spermi (la taur circa 5%) particip? la fecundarea ovulului, iar restul mor. Оn practic? s-a demonstrat c? pentru a ob?ine o rat? normal? de fecundare la vac? spre exemplu, pentru оns?mвn?are sunt necesare оntr-o doz? de sperm? diluat?, 12-25 milioane de spermi vii, оns? conform cercet?rilor mai recente, numai 10 mln ?i chiar 5 milioane de game?i. Rezult? c? la stabilirea gradului de dilu?ie a materialului seminal trebuie s? se rezerveze, pentru o doz? de inoculare, un minim de 10-12 milioane de spermi cu mi?c?ri active de оnaintare. Se admit pentru diluare ?i conservare numai ejaculatele care se оncadreaz? оn anumi?i parametri, оn func?ie de specie, a?a cum rezult? din tabelul urm?tor. Valorile medii ?i minimale ale principalelor оnsu?iri ale spermei admise pentru diluare |Specia |Volumul |Concentra?ia |Mobilitatea |Procentul | | |ejaculatului (ml)|spermei (miliarde|spermilor |maxim de | | | |spermi/ml) |(puncte) |spermi | | | | | |anormali | | |Media|Minim |Media|Minim |Media|Minim | | | | |admisibil | |admisibil | |admisibil | | |Taur |4,0 |3,0 |1,2 |0,6 |9 |8 |18 | |Berbec |1,0 |0,6 |3,0 |2,0 |9 |8 |14 | |Arm?sar|75,0 |40,0 |0,12 |0,05 |6-7 |5 |20 | |Vier |250,0|150,0 |0,15 |0,1 |7-8 |7 |20 | Condi?iile pe care trebuie s? le оndeplineasc? un diluant pentru conservarea spermei Men?inerea fecundit??ii unei sperme un timp mai оndelungat dup? recoltare este оn func?ie de calitatea diluantului ?i metoda de conservare. Оn procesul de prelucrare a materialului seminal se utilizeaz? solu?ii diluante, care trebuie s? оntruneasc? urm?toarele propriet??i: . s? fie izoterme – temperatura solu?iei diluante, a sticl?riei diverse cu care sperma intr? оn contact оn timpul procesului trebuie s? aib? valori apropiate, evitвndu-se astfel deteriorarea mobilit??ii prin ?oc termic; . s? fie izoterme cu sperma – presiunea osmotic? adecvat? a diluantului se regleaz? prin echilibrarea cantitativ? a ingredien?ilor; citratul de sodiu realizeaz? un mediu izotonic cu sperma; . s? aib? un pH apropiat de cel al plasmei seminale (6,2-6,8 pentru sperma de taur ?i berbec ?i 7,0-7,2 pentru cea de vier ?i arm?sar); . s? con?in? substan?e nutritive pentru spermi; adaosul de glucoz?, fructoz? sau alte hexoze la diluant reprezint? substratul energetic pentru metabolismul anaerob al celulelor spermatice; al?turi de alte ingrediente, acestea permit prelungirea semnificativ? a duratei de via?? a spermilor. Fosfolipidele din lapte, lecitina ?i lipoproteinele din g?lbenu?ul de ou reprezint? componentele nutritive ?i spermioprotectoare. Tot оn g?lbenu?ul de ou se remarc? prezen?a triptofanului, tirozinei ?i fenilalaninei, care au rol important оn procesele de dezaminare oxidativ? din sperm?, iar colesterolul ?i carotenul stimuleaz? activitatea succinic?, malic? ?i gliceroaldehid-3-fosfat-dehidrogenazic? оn spermi. Al?i compu?i din g?lbenu? ac?ioneaz? ca protectori ai enzimelor sulfhidrilice, servind оn cadrul proceselor oxidative ?i ca factori antiaglutinan?i оn sperm?; . s? con?in? substan?e crioprotectoare – crioprotec?ia este asigurat? de glicerin?, g?lbenu?ul de ou, lapte sau dimetilsulfoxid, substan?e care оmpiedic? cristalizarea apei de constitu?ie ?i pe aceast? cale, deteriorarea ireversibil? a membranei celulare a spermilor оn timpul congel?rii. . s? posede o ac?iune bacteriostatic? ?i chiar bactericid? – adaosul de antibiotice sau sulfamide оn concentra?ii bacteriostatice оmpiedic? multiplicarea microorganismelor din sperm?, proces care determin? elaborarea unor endo- ?i exotoxine bacteriene, ambele extrem de toxice pentru celulele spermatice. Apa din componen?a diluantului trebuie s? fie distilat? sau deionizat?, deoarece ionii metalelor au un efect toxic asupra spermilor, оn caz contrar se utilizeaz? substan?e chelatoare, care complexeaz? ace?ti ioni. Clasificarea diluan?ilor pentru sperm? Clasificarea diluan?ilor se face dup? urm?toarele criterii: compozi?ie, scopul ?i specia la care se utilizeaz?. Dup? scopul оn care sunt folosi?i diluan?ii pot fi clasifica?i оn felul urm?tor: . diluan?i pentru conservarea spermei la temperatura camerei; . diluan?i pentru conservarea spermei prin refrigerare; . diluan?i pentru conservarea spermei prin congelare. Оn func?ie de compozi?ie diluan?ii se оmpart оn urm?toarele grupe: 1 – diluan?i salini (cristaloizi). Se bazeaz? pe folosirea substan?elor chimice (citra?i, fosfa?i, tarta?i, sulfa?i etc.) la care se adaug? g?lbenu? de ou pentru protejarea spermilor de ?ocul termic ?i glucide (glucoz?, fructoz?, lactoz? etc.). La ora actual? diluan?ii salini sunt cei mai utiliza?i pe plan mondial, оncвt ei prezint? 70% din num?rul total, folosi?i la conservarea spermei. Exemplific?m cв?iva diluan?i salini: Diluan?i cu g?lbenu? de ou Ap? distilat? 100 ml Citrat de sodiu + 2H2O 2,9 grame G?lbenu? de ou 20% Se prepar? solu?ie salin? din 29 grame citrat de sodiu ?i 1 litru de ap? bidistilat?, apoi se sterilizeaz? prin fierbere sau autoclavare. Оn ziua dilu?rii spermei se adaug? 20% g?lbenu? de ou proasp?t. La оntregul diluant apoi se adaug? antibiotice: 1000 UI penicilin? ?i 500-1000 gama dehidrostreptomicin?. Se pot folosi concentra?ii diferite de citrat de sodiu: 3,2-3,6% оn loc de 2,9 gr%. G?lbenu? de ou citratat ?i glucoz? Citrat de sodiu (Na3C6H5O7) cristalizat cu 2 H2O 1,15 gr Glucoz? anhidr? 3,00 gr Ap? distilat? 100,0 ml G?lbenu? de ou 20,0 ml G?lbenu? de ou citratat ?i fosfatat Fosfat acid de potasiu (PO4H2K) 0,2 gr Fosfat acid de sodiu (PO4HNa) cristalizat cu 2 molecule de H2O 2,0 gr Ap? distilat? ad. 100 ml Dup? r?cire se adaug? g?lbenu? de ou 20-25% G?lbenu? de ou citratat cu glicerin? Оn diluantul cu g?lbenu? de ou citratat se adaug? 2-10% glicerin? pur?. Dup? 3 zile de conservare, acest diluant prezint? o fecunda?ie mai bun? decвt a diluantului g?lbenu? de ou citratat neglicerinat. Diluantul TRIS cu g?lbenu? de ou glicerinat, fructoz? ?i acid citric Tris hidroximetil-aminometan 6,056 gr Acid citric 3,0 gr Fructoz? 2,5 gr Ap? distilat? 166,320 gr Dup? prepararea solu?iei se оnc?lze?te la 90(C, apoi se r?ce?te ?i se оmparte оn dou? jum?t??i egale. Оnainte de folosirea uneia din p?r?i se adaug? 15,840 grame de ap? bidistilat?, 25 grame g?lbenu? de ou proasp?t, 0,1 grame streptomicin? ?i 100000 UI penicilin? G. La cealalt? parte a diluantului se adaug? 19,68 grame glicerin? pro analisis, 25 grame g?lbenu? de ou proasp?t, 0,1 grame streptomicin? ?i 100000 UI penicilin? G; pH trebuie s? fie ajustat la 6,85. |
|
|||||||||||||||||||||||||||||
|
Рефераты бесплатно, реферат бесплатно, сочинения, курсовые работы, реферат, доклады, рефераты, рефераты скачать, рефераты на тему, курсовые, дипломы, научные работы и многое другое. |
||
При использовании материалов - ссылка на сайт обязательна. |